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点击次数:2836 发布时间:2017-02-13

5XFAD小鼠基因检测报告-2016.9.7

动物品系: 5XFAD 小鼠                  操作日期:2016.9.5-2016.9.7

1.主要试剂         

试剂名称

生产厂家

备注

上游引物oIMR 3610

Invitrogen

下游引物oIMR 3611

Invitrogen

上游引物oIMR1644

Invitrogen

下游引物oIMR 1645

Invitrogen

阳性内标oIMR7338

Invitrogen

阳性内标oIMR7339

Invitrogen

TE缓冲液

Invitrogen

琼脂糖

Invitrogen

Sybr Safe 染液

Invitrogen

TAE缓冲液

自制

EmeraldAmp PCR Master Mix

TAKARA

RNase-free

GIBCO

注:实验中用到的试剂在备注项打“√”,没有用到的试剂打“—”,与列表不一致的试剂在备注中说明。

2.主要仪器: 

仪器名称

生产厂家

仪器型号

仪器编号

备注

MINI离心机

FORCE

SBC140-2

SB0363

漩涡混合仪

Scientific Industries

G560E

SB0484

电子天平

AL104-IC

梅特勒托利多

SB0006

PCR

BIO-RAD

Thermal Cycler

SB0407

移液器

Thermo/ Eppendorf/Brand

P10/P100/

P200/P1000

SB0108/SB0230

SB0608/SB0089

注:实验中用到的仪器在备注项打“√”,没有用到打“—”,与列表不一致的在备注中说明。

 

3.PCR操作步骤     

 

试剂

体积(μl

模板

1

oIMR3610

0.4

oIMR3611

0.4

oIMR1644

0.4

oIMR1645

0.4

oIMR7338

0.4

oIMR7339

0.4

Master mix (2×)

10

RNase-free

6.6

终体积

20

 

 

4. PCR反应条件

94  3 min

94  30 sec, 54 60 sec,72 60 sec  35×;

72  5 min

 

5. 1%琼脂糖凝胶电泳体系

    称取 1.6 (1.6g)琼脂糖加入  100  (100ml)TAE缓冲液中混匀,微波炉加热两次沸腾后加7μl染液,混匀,倒入板中凝固。凝固后每孔加入15μl样本,每行*孔加入5μl Marker。进行凝胶电泳。

6. 拍图

   完成的凝胶电泳经过凝胶成像系统拍图得出结果

 

 

 

 

 

7. 结果判定标准

引物名称

序列(5’→3’)

PCR产物大小

上游引物oIMR 3610

AGGACTGACCACTCGACCAG

377bp

下游引物oIMR 3611

CGGGGGTCTAGTTCTGCAT

上游引物oIMR1644

AATAGAGAACGGCAGGAGCA

608bp

下游引物oIMR 1645

GCCATGAGGGCACTAATCAT

阳性内标oIMR7338

CTAGGCCACAGAATTGAAAGATCT

324bp

阳性内标oIMR7339

GTAGGTGGAAATTCTAGCATCATCC

 

 

8. 结果判定

根据成像结果及判定标准,阳性动物编号如下:共计16只

8566、 8582、8584、8573、8586、8588、8577、8590、

8591、 8592、8543、8593、8546、8547、8595、8596

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