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SD大鼠肝内胆管上皮细胞,使用方法

更新时间:2019-08-22   点击次数:1559次
  SD大鼠肝内胆管上皮细胞,使用方法;
 
  1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
 
  取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。
 
  2、细胞传代:
 
  1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
 
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
 
  3)弃上清,沉淀细胞用12ml*培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
 
  4)待细胞*贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
 
  3、细胞冻存:
 
  1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
 
  2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
 
  3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
 
  4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
 
  4、细胞复苏:
 
  1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
 
  2)将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
 
  3)弃上清,沉淀用5ml*培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
 
  4)第二天,换用新鲜*培养基继续培养。
 
  SD大鼠肝内胆管上皮细胞,细胞传代:收到细胞后,请对细胞培养瓶外表进行消毒,将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲,待细胞恢复基本生长状态后,进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:
 
  (一)细胞未长至 85%时,用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,若培养瓶上无特殊标注,吸去剩余培养液,只留 6-8ml 培养液继续培养。
 
  (二)细胞已长满(达 85-95%)。即可进行传代,具体步骤如下:
 
  1.弃去培养液,用 PBS 洗涤 1-2 次,
 
  2.加入 1.0ml 胰酶消化液,37℃消化,显微镜下观察细胞消化情况,若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落,则迅速拿回操作台,加入双倍的含 10%血清的*培养液,终止消化并轻轻吹打细胞,使其变成单细胞悬液,
 
  3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min,弃上清,轻弹管底,将细胞弹散,
 
  4.加入新鲜培养液重悬细胞,进行传代、冻存,
 
  5.如果没有特别说明,建议收到细胞后的次传代比例为 1:2。