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血清分瓶注意事项

发布时间:2016-05-16   点击次数:1612次

三、胎牛血清的选择

市场上的胎牛血清种类繁多,鱼龙混杂,很多科研工作者,特别是刚接触细胞培养的人,难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验,总结如下:

一、外观

拿到血清,zui先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要

1、颜色

根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。

进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂。

总的来说,国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量的呈现出谈黄、微红色,如Gibco 16000,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。

2、沉淀

很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。

血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。

国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。

进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。

当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。

3、澄清度

进口胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低,表现为稀薄、清淡,而国产血清,因为绝大多数是新生牛血清,相对而言更加粘稠,颜色略深,这对于初步接触血清的人很难判断,但把两者进行对比,可容易分辨。

四、胎牛血清使用中的常见问题

1、 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

长时间储存在2-8时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20以下储存血清,并避免反复冻融。

我们建议血清应保存在-2O。若存放于4时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

2、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37,沉淀会自然消失。

4、 如何避免血清中产生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的产生:

(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

(2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

(3) 勿直接由-20直接至37解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

(4) 勿将血清置于37太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

 

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