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人肿瘤坏死因子α高敏 ELISA 试剂盒检测前准备工作

发布时间:2020-06-16   点击次数:557次
   人肿瘤坏死因子α高敏 ELISA 试剂盒检测前准备工作:
  1、请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。
  2、将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结 晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超 过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。
  1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。
  2、标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为1000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,依次倍比稀释成不同的梯度,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
  4、生物素化抗体工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配 制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作 浓度。当日使用。
  5、酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制 100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。 当日使用。
  人肿瘤坏死因子α高敏 ELISA 试剂盒操作程序:
  1、弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。
  2、每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.。
  3、取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  4、测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  5、根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
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