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人肿瘤坏死因子α高敏 ELISA 试剂盒检测前准备工作

更新时间：2020-06-16 点击次数：1010次

　　人肿瘤坏死因子α高敏 ELISA 试剂盒检测前准备工作:

　　1、请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

　　2、将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶*溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。

　　1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。

　　2、标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，依次倍比稀释成不同的梯度,标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。人肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　4、生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。

　　5、酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制 100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。

　　人肿瘤坏死因子α高敏 ELISA 试剂盒操作程序：

　　1、弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

　　2、每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.。

　　3、取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　4、测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

　　5、根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

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