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大鼠Elisa试剂盒试验详细记录是重点

发布时间:2015-03-02   点击次数:948次
   本大鼠Elisa试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠S100蛋白(S-100)水平。用纯化的大鼠S100蛋白(S-100)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入S100蛋白(S-100),再与HRP标记的S100蛋白(S-100)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,大鼠Elisa试剂盒经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的S100蛋白(S-100)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠S100蛋白(S-100)浓度。
  大鼠Elisa试剂盒操作程序
  1.确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
  2.将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。大鼠Elisa试剂盒处理后的标本按100ul每孔加入。
  3.酶标板加上盖,37℃反应90分钟。
  4.大鼠Elisa试剂盒反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
  5.将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
  6.0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次,大鼠Elisa试剂盒每次浸泡1分钟左右。
  7.将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
  8.0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次,大鼠Elisa试剂盒每次浸泡1-2分钟左右。
  9.每孔0.1ml依次加入TMB工作液,37℃避光反应,反应过程中,要经常的观察,当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色,后3-4孔差别不明显时,即可加入TMB终止液0.1ml/孔。(显色反应zui长不要超过30分钟)。
  10.大鼠Elisa试剂盒用酶标仪在450nm测定O.D.值。
  11.根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。
  大鼠Elisa试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知OTR浓度的标准品、未知浓度的样品 加入微孔酶标板内进行检测。先将OTR和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中OTR的浓度呈比例关系。
  大鼠Elisa试剂盒是基于经典酶联夹心技术原理,能测量鸭TNFα,只能用于研究用途,不得用于医学诊断。用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于大鼠Elisa试剂盒的*检测范围。样品的稀释应有详细记录。
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