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进口elisa试剂盒做标准曲线样品检测时需要注意的几个问题

发布时间:2020-05-09   点击次数:685次
   进口elisa试剂盒做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意:
  1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
  2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度zui陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
  3、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
  4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
  5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
  6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.
  ELISA试剂盒实验中注意事项:
  1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
  3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6. 底物请避光保存。
  7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  9. 本试剂不同批号组分不得混用。
  10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
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