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青霉素残留elisa试剂盒操作流程

更新时间：2020-06-11 点击次数：1087次

　　青霉素残留elisa试剂盒可用于定性、定量检测动物组织（肌肉、肝脏、鱼、虾等）、蜂蜜、牛奶、奶粉、冰淇淋、奶油和疫苗样本中青霉素的残留量。

　　试验原理：本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的青霉素和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗青霉素的抗体，加入酶标二抗后，用 TMB 底物显色，样本吸光度值与其所含残留物青霉素的含量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中青霉素的残留量。

　　青霉素残留elisa试剂盒操作流程如下：

　　（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。

　　（2）酶标板置4℃，包被过夜。

　　（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

　　（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

　　（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　（6）洗板，同（4）。

　　（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

　　（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　（9）洗板，同（4）。

　　（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

　　（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

　　（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

　　（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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