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Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应标准品的制备及应用研究

发布时间:2013-03-03   点击次数:1210次

【Author】 ZHANG Dan-fang,TANG Shi-jie,MAO Xiao-yan,XU Jin-hua,PENG Li-hong(Cleft Lip and Palate Treatment Center,The Second Affiliated Hospital,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China)

【机构】 汕头大学医学院第二附属医院唇腭裂中心汕头大学医学院第二附属医院唇腭裂中心 广东汕头515041广东汕头515041

【摘要】 目的:制备用于Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准品。方法:提取胚胎上颌突组织总RNA,行逆转录反应获得*链的cDNA,再通过PCR回收获得预期Satb2基因片段;通过T-A克隆将该片段插入pGMT质粒载体;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。结果:重组质粒经PCR扩增及序列测定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。结论:所构建的pGMT/Satb2基因实时荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此法可作为实时荧光定量PCR检测Satb2基因的标准方法。

 
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